P2RY12(也稱為P2Y12)是一種腺苷5'-二磷酸(ADP)受體,也是嘌呤能G蛋白偶聯(lián)受體P2Y家族的成員。它在外周
組織的血小板中表達(dá),也在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞(Homeostatic Microglia)中特異性表達(dá)。由于P2RY12幾乎
不在巨噬細(xì)胞中表達(dá),所以它是用于區(qū)分存在腦血管周圍的巨噬細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的有效標(biāo)志物1)。此外,ADP可用
作細(xì)胞損傷的信號,小膠質(zhì)細(xì)胞中的P2RY12被認(rèn)為在接收神經(jīng)細(xì)胞損傷方面發(fā)揮作用。
本產(chǎn)品為豚鼠來源多克隆抗體,可用于免疫組織染色的多重染色。
外觀:液體
濃度:蛋白濃度0.45~0.65 mg/mL
1) Butovsky, O. et al.: Neurosci., 17(1), 131(2014).
抗體信息
※ 大鼠的染色實例請查看下方“數(shù)據(jù)”部分。
Protocol(示例)
1 灌注固定
使用檸檬酸鈉/PBS灌注除血后,4% PFA灌注
2 后固定
4% PFA(~24 h)
3 蔗糖替換
30%蔗糖/PBS(4℃,過夜~約2天)
4 制備冰凍切片
去除蔗糖后,制備冰凍包埋塊,并用低溫恒溫器制備30 μm厚的切片
5 封閉
5%正常山羊血清,0.3% Triton X-100/PBS(4℃,過夜)
6一抗
抗P2RY12,豚鼠(1︰1,000),1%正常山羊血清,0.3% TritonX-100/PBS(4℃,過夜~2 天)
7 清洗
0.3% TritonX-100/PBS (5 min×3次)
8 二抗
Alexa Fluor? 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG(H+L)(1:500)(產(chǎn)品編號:568-77901),1%正常山羊血清,0.3% TritonX-100/PBS(室溫,2 h)
9 清洗
0.3% TritonX-100/PBS(5 min×3次)
10 封裝
封片劑封裝,4℃下避光存儲
性能數(shù)據(jù)
與抗Iba1抗體比較
使用抗P2RY12抗體和抗Iba1抗體對小鼠大腦(冰凍切片)進(jìn)行免疫組織染色。
<數(shù)據(jù)提供>
京都工藝?yán)w維大學(xué) 應(yīng)用生物學(xué)系 宮田老師
使用抗體
P2RY12
一抗:抗P2RY12,豚鼠(產(chǎn)品編號:011-28873,本產(chǎn)品)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor? 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG(H+L)(產(chǎn)品編號:568-77901)
Iba1
一抗:抗iba1,兔源(免疫細(xì)胞化學(xué)用)(產(chǎn)品編號:019-19741)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor? 594-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)(產(chǎn)品編號:566-80511)
【結(jié)果】
已確認(rèn)P2RY12信號和Iba1信號的共定位。
鑒別小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞
使用抗P2RY12抗體(小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物)、抗Iba1抗體(小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞標(biāo)志物)和抗層粘連蛋白抗體(腦血管基底膜標(biāo)志物)對小鼠大腦皮層和延
髓末端的冰凍切片進(jìn)行三重染色,確認(rèn)細(xì)胞定位。
<數(shù)據(jù)提供>
京都工藝?yán)w維大學(xué) 應(yīng)用生物學(xué)系 宮田老師
使用抗體
P2RY12
一抗:抗P2RY12,豚鼠(產(chǎn)品編號:011-28873,本產(chǎn)品)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor? 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG(H+L)(產(chǎn)品編號:568-77901)
Iba1
一抗:抗iba1,兔源(免疫細(xì)胞化學(xué)用)(產(chǎn)品編號:019-19741)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor? 594-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)(產(chǎn)品編號:566-80511)
層粘連蛋白
一抗:抗層粘連蛋白抗體(大鼠,宮田老師實驗室制備)1︰200
二抗:DyLight? 405 結(jié)合AffiniPure 山羊抗大鼠 IgG (H+L)(生產(chǎn)商編碼:112-475-003)
【結(jié)果】
Iba1陽性細(xì)胞中,腦實質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞呈P2RY12陽性,可能是小膠質(zhì)細(xì)胞(三角箭頭)。而Iba1陽性/P2RY12陰性的細(xì)胞存在于腦血管基底膜周圍,這些細(xì)胞可
能是巨噬細(xì)胞(箭頭)。
與抗Iba1抗體和抗TMEM119抗體比較
使用抗P2RY12抗體、抗Iba1抗體和抗TMEM119抗體對小鼠大腦和脊髓(冰凍切片)進(jìn)行免疫組織染色。
使用抗體
P2RY12
一抗:抗P2RY12,豚鼠(產(chǎn)品編號:011-28873,本產(chǎn)品)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor? 647 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)(產(chǎn)品編號:566-78421)
Iba1
一抗:抗iba1,山羊源(產(chǎn)品編號:011-27991)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor 488 AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) (產(chǎn)品編號:561-78351)
TMEM119
一抗:其他公司抗TMEM119抗體(兔源)1︰100
二抗:Alexa Fluor? 594-AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG(H+L)(產(chǎn)品編號:561-78471)
【結(jié)果】
與抗TMEM119抗體相比,使用FUJIFILM Wako的抗P2RY12抗體染色能更清晰地檢測細(xì)微的突起結(jié)構(gòu)。
與其他公司產(chǎn)品比較
使用本產(chǎn)品和其他公司的抗P2RY12抗體對小鼠大腦和脊髓(冰凍切片)進(jìn)行免疫組織染色。
使用抗體
本產(chǎn)品
一抗:抗 P2RY12,豚鼠(產(chǎn)品編號:011-28873,本產(chǎn)品)1︰1,000(抗體濃度:0.5 μg/mL)
二抗:Alexa Fluor? 488 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)(產(chǎn)品編號:562-78401)
其他公司產(chǎn)品
一抗:其他公司 抗P2RY12(兔源)1︰200(抗體濃度:0.5 μg/mL)
二抗:Alexa Fluor? 488 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG(H+L)(產(chǎn)品編號:567-78451)
【結(jié)果】
傳統(tǒng)產(chǎn)品中可觀察到神經(jīng)細(xì)胞的非特異性信號(三角箭頭),而本產(chǎn)品中幾乎檢測不到非特異性信號。
應(yīng)用數(shù)據(jù)
免疫組織染色
用戶反饋
以下是研究人員提供的評估問卷結(jié)果。
評價(原文翻譯)
產(chǎn)品列表
品牌 | 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 等級 | 規(guī)格 |
FUJIFILM Wako | 015-28871 | Anti P2RY12, Guinea Pig 抗P2RY12,豚鼠源 | for Immunochemistry | 10μL |
FUJIFILM Wako | 011-28873 | Anti P2RY12, Guinea Pig 抗P2RY12,豚鼠源 | for Immunochemistry | 100μL |
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